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兩天完成泛癌基因組體細胞突變靶向重測序擴增子建庫

TruSeq Amplicon - Cancer Panel

英文名稱：TruSeq® Amplicon - Cancer Panel，縮寫TSACP

中文名稱：TruSeq 擴增子法癌癥Panel

用途：癌癥基因組體細胞突變擴增子建庫試劑盒，適用于FFPE樣本。

TruSeq Amplicon - Cancer Panel 提供預先設計的、優化的寡核苷酸探針，富集212個擴增子來檢測48個癌癥相關基因中的突變區域。

TruSeq Amplicon - Cancer Panel能夠對包括BRAF，KRAS和EGFR在內的重要癌癥相關基因進行高度敏感的突變分析。這些基因突變與許多癌癥有關，包括黑色素瘤，結直腸癌，卵巢癌和肺癌。這種檢測方法從珍貴的FFPE樣品篩選這些重要變異的*能力將從多種腫瘤中解開大量基因組信息。

The TruSeq Amplicon - Cancer Panel enables highly sensitive mutation detection studies of important cancer-related genes, including BRAF, KRAS, and EGFR. Mutations in these genes are linked to many cancers, including melanoma, colorectal, ovarian, and lung cancer.

TSACP特點

提供預先設計的，優化的寡核苷酸探針，用于測序> 35千堿基（kb）的靶基因組序列中的突變熱點。

在高度多重的單管反應中，用212個擴增子靶向48個基因。

對來自選定基因（如BRAF，KRAS和EGFR）的數百個癌癥熱點進行測序。

兩天內完成基因組DNA的全面分析數據。

zui準確的數據能夠可靠地檢測低于5％的突變頻率。

使用簡單的儀器上自動分析軟件對所有樣品進行變異調用和分析。

TSACP應用

泛癌分析：快速高效地發現、驗證和篩選癌癥相關遺傳變異。

TSACP參數

分析時間 8 hours

手動操作 3.5 hours

加樣量 150 ng high-quality genomic DNA, 250 ng FFPE genomic DNA

測序儀 MiniSeq, MiSeq, MiSeqDx in Research Mode

核酸 DNA

特別樣本 FFPE Tissue 福爾馬林固定包埋組織

突變類型Insertions-Deletions (indels), Somatic Variants

種屬 人

癌癥類型 Pan-Cancer 泛癌

方法 擴增子測序 靶向基因測序Amplicon Sequencing, Targeted DNA Sequencing

TSACP適用樣本

高質量基因組DNA：250ng（推薦），150ng（zui低）

FFPE基因組DNA：250ng （zui低）

簡化的操作流程

TSACP將一些操作流程簡化，包括FFPE樣品的DNA質量控制分析，簡單磁珠樣品標準化，自動化簇生成和雙端測序以及儀器上的數據分析。利用MiSeq系統的長雙端讀取能力，速度和高數據質量，現在可以在幾天內完成整個項目，而不是幾個月。

樣本質控—樣本目標基因的擴增子獲得—擴增子測序和分析

擴增子獲得流程：

一對寡核苷酸用來獲得一個擴增子。將這些寡核苷酸雜交至未片段化的基因組DNA（96孔板），隨后進行延伸和連接以形成DNA模板（帶引物序列的目標區域）。使用隨試劑盒提供的索引接頭，文庫被索引，PCR擴增，然后在測序之前pool到單個試管中。

A癌癥panel寡核苷酸探針的雜交

B延伸和連接

C通過PCR添加索引（indexes）和測序接頭

D收獲準備測序的擴增子

TSACP性能規格

Panel 大小35 kb；內容 212 amplicons；擴增子大小 170–190 bp；DNA Input 250 ng

Assay Time < 7 hrs, 2.5 hrs hands-on；Enrichment Specificity > 85%；Coverage Uniformity > 85% at 0.2× mean

Dropouts* 0 （Dropouts are defined as amplicons having no sequencing coverage when the sample achieves a mean sequencing depth of > 1000×.）

TSACP目標基因列表

名詞解釋：Pan-Cancer（泛癌）

基因組圖譜泛癌計劃：由于起源部位、細胞類型、基因突變形式的不同,腫瘤可表現出不同的形態。這些因素同時影響腫瘤的治療效果。雖然已經證實許多基因的改變直接導致了表型的改變,然而,許多腫瘤譜系中復雜分子機制依然未*闡明。因此,腫瘤基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas,TCGA）研究網絡分析了大量人類腫瘤,以期發現DNA、RNA、蛋白質和表觀遺傳學水平的分子改變。含豐富數據的結果給我們提供了一個機會,對整個腫瘤譜系的共性、個性及新觀點形成一個整體描繪?；蚪M圖譜泛癌計劃zui先比較了12種腫瘤類型。對不同腫瘤分子改變及其功能的分析,未來會告訴我們如何將有效的治療方法應用于類似基因表型的腫瘤。

TruSeq Amplicon - Cancer Panel Kit 組件 (FC-130-1008)：

四個試劑盒包括兩個Pre-Amplification、一個Post-Amplification和一個TruSeq Amplicon - Cancer Panel Oligo Kit, Pre-Amplification試劑盒。

TSACP訂購信息

TSACP搭配試劑：

Illumina FFPE QC Kit WG-321-1001

TruSeq Custom Amplicon Index Kit (96 indices, 384 Samples) FC-130-1003

MiSeq Reagent Kit (300-cycles - PE) MS-102-2002

可選: TruSeq Index Plate Fixture and Collar Kit (2 Each) FC-130-1007

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