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KAPA Library Quantification Kit 文庫(kù)定量試劑盒

適用Illumina文庫(kù)

英文名稱：KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms

中文名稱：illumina測(cè)序文庫(kù)定量試劑盒

KAPA 文庫(kù)定量試劑盒（illumina平臺(tái)）特別設(shè)計(jì)用于Illumina測(cè)序文庫(kù)的準(zhǔn)確和可重復(fù)的定量，包含qPCR定量所需所有試劑。試劑盒含有新型KAPA SYBR FAST DNA聚合酶，保證效率的前提下，能定量平均片段長(zhǎng)度高達(dá)1kb的Illumina文庫(kù)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

試劑盒適用序列GC含量范圍寬泛，平均片段長(zhǎng)度可達(dá)1 kb。

除了NGS文庫(kù)定量之外，該試劑盒還可用于檢測(cè)Illumina文庫(kù)制備過(guò)程中的污染情況。

文庫(kù)定量分析包括重復(fù)的移液步驟，容易自動(dòng)化。

經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試，以確保zui小的批次間差異。

產(chǎn)品應(yīng)用和兼容性

KAPA Library定量試劑盒（illumina平臺(tái)）特別設(shè)計(jì)用于Illumina測(cè)序文庫(kù)的準(zhǔn)確和可重復(fù)的定量。適用文庫(kù)不限類型、構(gòu)建方式和illumina測(cè)序儀型號(hào)，只要濃度> 0.0002 pM，并且含有與試劑盒中引物互補(bǔ)的序列（Illumina P5 and P7流動(dòng)池寡核苷酸序列），都可以使用該試劑盒進(jìn)行定量。

KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms are suitable for the quantification of any NGS library (prepared for Illumina sequencing) which contains the P5 and P7 flow cell sequence motifs. Libraries constructed using full-length universal or indexed TruSeq™ adapters can be quantified after adapter ligation. Libraries prepared with partial or stem-loop adapters can only be quantified with this kit after library amplification, during which indexes (and flow cell sequences) are added. To ensure compatibility, compare the adapter sequences used during library preparation with the library quantification primer sequences in Product Description.

Ensure that the correct KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix is used, in accordance with the reference dye requirements (if any) of the qPCR instrument to be used for library quantification.

產(chǎn)品組份

適用于Illumina平臺(tái)的KAPA Library定量試劑盒包含所有含P5和P7流動(dòng)池序列的Illumina文庫(kù)進(jìn)行qPCR定量所需的完整試劑。

*試劑盒包含標(biāo)準(zhǔn)DNA，引物混合物，qPCR混合液

試劑盒包含：

•文庫(kù)定量DNA標(biāo)準(zhǔn)品 1 – 6 (a 10-fold dilution series of a linear, 452 bp template)

•文庫(kù)定量引物Primer Premix (10X), 引物序列：

Primer 1: 5'-AAT GAT ACG GCG ACC ACC GA-3'

Primer 2: 5'-CAA GCA GAA GAC GGC ATA CGA-3'

•KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix (2X)，各種passive reference染料。

該試劑盒含有新型KAPA SYBR FAST DNA聚合酶，通過(guò)定向進(jìn)化過(guò)程設(shè)計(jì)用于高性能SYBR Green I型qPCR。改造的聚合酶以相似的效率擴(kuò)增不同DNA片段的能力使得能夠使用通用標(biāo)準(zhǔn)來(lái)可靠地量化平均片段長(zhǎng)度高達(dá)1kb的所有Illumina文庫(kù)，而不管文庫(kù)類型或GC含量如何。

KAPA SYBR FAST是一種抗體介導(dǎo)的熱啟動(dòng)DNA聚合酶制劑。

使用方法

1. 使用KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix和引物（靶向Illumina P5和P7流動(dòng)池序列）

通過(guò)qPCR法擴(kuò)增DNA標(biāo)準(zhǔn)品（6個(gè)，預(yù)稀釋）和稀釋的文庫(kù)樣品來(lái)進(jìn)行文庫(kù)定量。

2. 繪制每個(gè)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的平均Cq值與log10（濃度：pM）的關(guān)系曲線，以產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用定量對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算稀釋的文庫(kù)樣品的濃度。

注意：高通量NGS管路強(qiáng)烈建議使用自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱KAPA庫(kù)量化技術(shù)指南。

Library quantification is performed by amplifying the set of six pre-diluted DNA Standards and diluted library samples by qPCR, using the KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix and primers targeting the Illumina P5 and P7 flow cell oligo sequences. The average Cq score for each DNA Standard is plotted against log10(concentration in pM) to generate a standard curve. The concentrations of diluted library samples are then calculated against the standard curve, using absolute quantification.

KAPA Biosystems是一家美國(guó)生物公司，成立于2006年，其生產(chǎn)基地位于南非開普敦。KAPA Biosystems致力于研發(fā)、生產(chǎn)下一代PCR（Next-Generation PCR）所需的生物酶。目前其分子進(jìn)化平臺(tái)開發(fā)的產(chǎn)品已被廣泛應(yīng)用于DNA擴(kuò)增、二代測(cè)序、分子診斷等領(lǐng)域。

KAPA文庫(kù)定量產(chǎn)品系列

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