mRNA 信使RNA（英語(yǔ)：messenger RNA，縮寫(xiě)：mRNA），是由DNA經(jīng)由轉(zhuǎn)錄而來(lái)，帶著相應(yīng)的遺傳訊息，為下一步轉(zhuǎn)譯成蛋白質(zhì)提供所需的訊息。可用來(lái)研究基因表達(dá)調(diào)控。

PCR 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（英文：Polymerase chain reaction，縮寫(xiě)PCR），是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于擴(kuò)增特定的DNA 。在基因文庫(kù)構(gòu)建中，可以從微量起始DNA樣本中得到測(cè)序所需大量DNA產(chǎn)物。

TruSeq RNA文庫(kù)制備試劑盒v2

英文名稱(chēng)：TruSeq RNA Library Preparation Kit v2

中文名稱(chēng)：TruSeq RNA文庫(kù)制備試劑盒v2

Illumina TruSeq RNA文庫(kù)制備試劑盒v2 可以從總RNA生成mRNA的測(cè)序文庫(kù)，用于后續(xù)的簇生成和DNA測(cè)序。

Illumina測(cè)序流程：

文庫(kù)構(gòu)建

簇生成（illumina測(cè)序平臺(tái)特配試劑）

上機(jī)測(cè)序

TruSeq RNA Library Preparation Kit v2 借助增強(qiáng)的多重分析功能和提供預(yù)混試劑的簡(jiǎn)單工作流程，可從總RNA生成專(zhuān)注于mRNA的測(cè)序文庫(kù)。

TruSeq RNA文庫(kù)制備試劑盒v2提供24個(gè)*的標(biāo)簽，具備更強(qiáng)的多重分析性能，可處理大量樣本（例如，可在HiSeq 2500系統(tǒng)單次運(yùn)行中處理多達(dá)384個(gè)RNA-Seq樣本）。

與之前的方法相比，預(yù)先混合試劑消除了多數(shù)移液步驟并減少了純化量，同時(shí)zui大限度地縮短了手動(dòng)操作時(shí)間。如此，可通過(guò)NGS平臺(tái)提供的zui易用樣本制備工作流程實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的高通量RNA測(cè)序研究。

• Simple Workflow for RNA and DNA:流程簡(jiǎn)化

Master-mixed reagents and minimal hands-on steps.

• Scalable and Cost-Effective Solution:方案精簡(jiǎn)

Optimized formulations and plate-based processing enables large-scale studies at a lower cost.

• Enhanced Multiplex Performance:高通量多路運(yùn)行

Twenty-four adaptor-embedded indexes enable highthroughput processing and greater application flexibility.

• High-Throughput Gene Expression Studies:高通量基因表達(dá)研究

Gel-free, automation-friendly RNA library preparation for rapid expression profiling.

——TruSeq RNA Library Preparation Kit v2 參數(shù)

——Truseq RNA文庫(kù)構(gòu)建原理

dT磁珠抓取含polyA尾的mRNA，從總RNA中提取mRNA。

逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)合成cDNA。

PCR法擴(kuò)增DNA產(chǎn)物。

——TruSeq RNA Library Preparation Kit v2組份和保存

Box A: 保存 -15° to -25°C

Box B: 保存 -15° to -25°C

Box A和 Box B主要作用：cDNA末端修復(fù)。

注：根據(jù)需要選擇Box A或 Box B。Box A和 Box B的區(qū)別是RNA接頭Index 不同。

Box 1: 保存 2° to 8°C，主要成分：RNA 純化磁珠。

Box 2: 保存 -15° to -25°C 主要成分：磁珠清洗，cDNA模板合成。

PCR Prep Box: 保存 -15° to -25°C。主要作用：PCR法富集產(chǎn)物。

——TruSeq RNA文庫(kù)制備試劑盒v2 加樣量要求

TruSeq RNA Sample Preparation v2 protocols are optimized for 0.1–1 µg of total RNA.Lower amounts of RNA might result in inefficient ligation and low yield.

優(yōu)化加樣量：總RNA 0.1-1µg

RNA量低于0.1µg可能會(huì)影響連接效率導(dǎo)致產(chǎn)量低。

You can also use previously isolated mRNA as starting material. Use the entire fraction of mRNA purified from 0.1–1 µg of total RNA.

也可以預(yù)先從總RNA分離得到mRNA作為起始樣本。從0.1-1µg總RNA分離的所有mRNA都要用于加樣。

——Illumina® TruSeq® RNA Sample Preparation Kit v2制備流程

This protocol explains how to convert the mRNA in total RNA into a library of template molecules suitable for subsequent cluster generation and DNA sequencing using the reagents provided in the Illumina® TruSeq® RNA Sample Preparation Kit v2.

The first step in the workflow involves purifying the poly-A containing mRNA molecules using oligo-dT attached magnetic beads. Following purification, the mRNA is fragmented into small pieces using divalent cations under elevated temperature. The cleaved RNA fragments are copied into first strand cDNA using reverse transcriptase and random primers. Second strand cDNA synthesis follows, using DNA Polymerase I and RNase H.

The cDNA fragments then go through an end repair process, the addition of a single ‘A’ base, and then ligation of the adapters. The products are then purified and enriched with PCR to create the final cDNA library.

流程概述：使用Illumina® TruSeq® RNA Sample Preparation Kit v2試劑將總RNA的mRNA轉(zhuǎn)化為模板文庫(kù)，以用于后續(xù)的DNA測(cè)序。

1. 純化：通過(guò)oligo-dT磁珠法純化得到poly-A mRNA分子。

2. mRNA 切段：高溫，二價(jià)陽(yáng)離子。

3. mRNA 段子轉(zhuǎn)為*條cDNA：逆轉(zhuǎn)錄酶，隨機(jī)引物。

4. 第二條cDNA合成：DNA 聚合酶I ，RNase H。

5. cDNA 段子末端修復(fù)：添加A堿基，連接接頭。

6. 產(chǎn)物純化，PCR富集，得到cDNA文庫(kù)。

TruSeq® RNA Sample Preparation Kit v2文庫(kù)制備方法分為低樣品量和高樣品量?jī)煞N。

——TruSeq® RNA Sample Preparation Kit v2特點(diǎn)

Multiplexing capability with 12 indexing adapters for a total of 24 adapters Ability to process up to 384 samples per run on a HiSeq 2000

Optimized fill volumes Automation support Streamlined workflow:

Master-mixed reagents reduce reagent containers and pipetting

Universal adapter for preparation of mRNA samples

High throughput:

Enables simultaneous preparation of multiplexed mRNA samples

Volumes are optimized for standard 96-well plate

Troubleshooting with built-in process control checks

Universal index adapter tags for all samples. Additional adapters and primers are not necessary.

——TruSeq RNA和DNA文庫(kù)制備相關(guān)產(chǎn)品

RNA文庫(kù)制備

TruSeq RNA Library Preparation Kit v2, Set A

(12 indexes, 48 samples) RS-122-2001

TruSeq RNA Library Preparation Kit v2, Set B

(12 indexes, 48 samples) RS-122-2002

DNA文庫(kù)制備

TruSeq DNA Library Preparation Kit v2, Set A

(12 indexes, 48 samples) FC-121-2001

TruSeq DNA Library Preparation Kit v2, Set B

(12 indexes, 48 samples) FC-121-2002

For Cluster Generation on cBot and Sequencing on the HiSeq 2000/1000 and HiScanSQ

TruSeq Paired-End Cluster Kit v3—cBot—HS

(1 flow cell) PE-401-3001

TruSeq Single-Read Cluster Kit v3—cBot—HS

(1 flow cell) GD-401-3001

For Cluster Generation on cBot and Sequencing on the Genome AnalyzerIIx

TruSeq Paired-End Cluster Kit v2—cBot—GA

(1 flow cell) PE-300-2001

TruSeq Single-Read Cluster Kit v2—cBot—GA

(1 flow cell) GD-300-2001

For Cluster Generation on the Cluster Station and Sequencing on the Genome AnalyzerIIx

TruSeq Paired-End Cluster Kit v5—CS—GA

(1 flow cell) PE-203-5001

TruSeq Single-Read Cluster Kit v5—CS—GA

(1 flow cell) GD-203-5001

mRNA測(cè)序簡(jiǎn)介

mRNA測(cè)序(mRNA-Seq)已迅速成為分析疾病狀況、生物過(guò)程及廣泛研究設(shè)計(jì)中的轉(zhuǎn)錄組的方法。mRNA-Seq不僅可提供極為準(zhǔn)確且高靈敏度的量化基因表達(dá)，還可識(shí)別已知的和新的轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體、基因融合和其他特征及等位基因特異性表達(dá)。mRNA-Seq可提供編碼轉(zhuǎn)錄組的完整視圖，而并不受限于先驗(yàn)知識(shí)。

mRNA測(cè)序的優(yōu)勢(shì)

與基因表達(dá)芯片相比，mRNA-Seq在分析轉(zhuǎn)錄組方面具有諸多優(yōu)勢(shì)：

該方法適用于更廣泛的動(dòng)態(tài)范圍，不僅可增加靈敏度，還可提高基因表達(dá)中測(cè)量的倍數(shù)變化的準(zhǔn)確性。

可捕獲已知特征和新發(fā)特征

可廣泛應(yīng)用于眾多物種

用于癌癥研究的mRNA-Seq

 癌癥會(huì)積累大量的基因變化，但通常只有少數(shù)發(fā)展為腫瘤。借助mRNA-Seq監(jiān)控基因表達(dá)變化有助于識(shí)別疾病預(yù)后或治療反應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。mRNA-Seq還支持對(duì)基因表達(dá)和病因進(jìn)行特征分析，并可了解影響腫瘤分類(lèi)和發(fā)展的變異。

用于復(fù)雜疾病研究的基因表達(dá)圖譜

 基因表達(dá)圖譜和調(diào)控研究可讓您形象地了解基因組、表觀(guān)遺傳和環(huán)境因素對(duì)常見(jiàn)疾病的影響程度。mRNA-Seq是一種成熟的探查和圖譜分析工具，可提供具有較高影響力的研究結(jié)果，并識(shí)別針對(duì)一系列復(fù)雜疾病的下游調(diào)查的目標(biāo)靶點(diǎn)，其中包括神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、新陳代謝以及心血管方面的疾病。

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